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產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

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TA克隆試劑盒Mighty TA-cloning Kit
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格（元） 說明書 數(shù)量
Takara 6028 Mighty TA-cloning Kit 20 Rxns ￥825
無標(biāo)題文檔
 
 
RNA起始合成cDNA → PCR擴增目的片段 → PCR產(chǎn)物純化 → In-Fusion無縫克隆 → 轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞
 
TA克隆
基因組DNA  
粘性末端連接
 
 
■ 制品內(nèi)容 (20 次量)
pMD20-T vector (50 ng/μl) 1 μg (20 μl)
Ligation Mighty Mix*1 50 μl × 2
Positive Control Insert*2 10 μl
   
*1: Ligation Mighty Mix與DNA Ligation Kit<Mighty Mix> (Code No.: 6023) 是同一種試劑。
*2: 3’端帶有“A”突出端的DNA片段 (約200 bp)。 (以E.coli 基因組DNA為模板，使用TaKaRa Ex Taq 進行PCR反應(yīng)得到的擴增產(chǎn)物。)(10 ng/μl)
 
■ 制品說明
使用Taq DNA聚合酶進行PCR反應(yīng)，擴增獲得的PCR產(chǎn)物3’端附有一個“A” 堿基。利用3’端附有“A” 堿基的PCR產(chǎn)物進行克隆時，與含有3’-T末端的載體通過T-A堿基互補配對原則進行克隆，此種方法被稱為T-A克隆。
Mighty TA-cloning Kit是在短時間內(nèi)快速地將PCR產(chǎn)物進行T-A克隆的試劑盒。連接反應(yīng)使用DNA Ligation Kit<Mighty Mix>，操作簡便，可在短時間內(nèi)高效地進行連接反應(yīng)。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 使用注意事項
1. Ligation Mighty Mix在冰上融解，輕輕混合后再使用。
2. 長片段PCR產(chǎn)物（2 kb以上）進行DNA克隆時，連接反應(yīng)時間請延長至數(shù)小時。
3. 克隆時，根據(jù)插入片段的長度和方向，有時即使插入了DNA片段也會有不出現(xiàn)終止密碼或讀碼框不改變的情況發(fā)生，在藍白選擇培養(yǎng)基上會形成淡藍色菌落。出現(xiàn)這種現(xiàn)象時，建議進行菌落PCR確認(rèn)插入片段。
4. 進行切膠回收純化DNA片段時要避免UV照射時間過長。長時間照射，DNA會受到損傷，影響克隆效率。
5. PCR用質(zhì)粒模板與克隆載體 (pMD20-T vector；具有Ampr) 有同樣的選擇標(biāo)記基因時，為防止出現(xiàn)質(zhì)粒模板自身的轉(zhuǎn)化菌落，將PCR反應(yīng)液凝膠電泳后回收目的片段，純化后再進行克隆。
 
 

頁面更新：2023-12-01 16:15:59

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