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產(chǎn)品選擇指南

技術服務信息

當前位置：首頁> 產(chǎn)品選擇指南 > 一般PCR相關制品 > RT-PCR試劑盒 > RT-PCR試劑盒TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
RT-PCR試劑盒TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格（元） 說明書 數(shù)量
Takara RR019A TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 100 Rxns ￥2,358
Takara RR019B (A × 2) TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 100 Rxns × 2 ￥4,298
無標題文檔
※ 上表中產(chǎn)品貨期不定，請您在下單前咨詢當?shù)卮砩獭?/STRONG>
 
■ 制品內(nèi)容 (Code No.: RR019A : 100 次量*1)
AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl) (Avian Myeloblastosis Virus來源)
50 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 25 μl
Random 9 mers*2 (50 pmol/μl) 50 μl
Oligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl) 50 μl
RNase Free dH2O 1 ml
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) 25 μl
M13 Primer M4*2 (20 pmol/μl) 50 μl
10 × RT Buffer [100 mM Tris-HCl (pH8.3)，500 mM KCl] 1 ml
5 × PCR Buffer 1 ml
dNTP Mixture (各10 mM) 150 μl
MgCl2 (25 mM) 1 ml
Control R-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA下游引物) 25 μl
Control F-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA上游引物) 25 μl
Positive Control RNA*3 (2 × 105 copies/μl)
(Transcribed poly(A)+ RNA of pSPTet3 plasmid)		 25 μl
 
*1：1次反應即10 μl RT及 50 μl PCR
*2：引物序列
引物名稱 各引物序列
Random 9 mers
        5′-(P)NNNNNNNNN-3′
Oligo dT-Adaptor Primer
        包含dT區(qū)域及M13 Primer M4序列。
Control F-1 Primer
        5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer
        5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
M13 Primer M4
        5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′
*3：Positive Control RNA
本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。Control RNA (約1.4 kb) 是帶有30個A堿基的具有Poly(A)+ 尾的RNA。當把Control RNA經(jīng)RT-PCR合成的雙鏈cDNA插入質(zhì)粒時，該質(zhì)粒便可獲得四環(huán)素抗性。Control RNA簡圖見圖1。
圖1. Positive Control RNA：使用各種引物所能擴增的DNA片段
 
■ 制品說明
PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈式反應) 是一種體外擴增DNA的簡單而有效的方法。雖然原理上PCR法是擴增DNA，RNA不能直接被擴增，但是經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄酶的作用把RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，PCR法便可應用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應用于RNA的構造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領域。
TaKaRa RNA PCR Kit Ver.3.0是使用AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由來的反轉(zhuǎn)錄酶將RNA合成cDNA，然后在同一反應管中使用Hot Start PCR用TaKaRa Ex Taq HS DNA聚合酶擴增此cDNA的RT-PCR試劑盒。本試劑盒含有從RNA到cDNA，然后使用PCR法擴增此cDNA所需的全部試劑，可實現(xiàn)簡單高效的RNA分析。
本試劑盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的特殊設計，大大地提高了Poly(A)+ RNA 3′端區(qū)域的cDNA合成效率。Hot Start PCR用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS的應用，避免擴增前由于錯配或引物二聚體產(chǎn)生的非特異性擴增。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ RNA LA PCR的原理
本試劑盒使用AMV由來的反轉(zhuǎn)錄酶由RNA合成cDNA，并可在同一反應管中使用TaKaRa Ex Taq HS擴增此cDNA。Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特異性下游引物等均可作為反轉(zhuǎn)錄引物用于cDNA合成。Oligo dT-Adaptor Primer同時適用于3′-RACE實驗。
圖2. RNA PCR的原理
 
■ 特點
RNA模板
   適用于所有RNA
擴增片段大小
   ≤5 kb
反轉(zhuǎn)錄酶
   AMV Reverse Transcriptase XL
DNA Polymerase
   TaKaRa Ex Taq HS
RNase Inhibitor
   必須使用 (Kit中含有)
合成第一條cDNA鏈的引物
   Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或 特異性下游PCR Primer 可供選擇
3′-RACE法
  RT反應時使用Oligo dT-Adaptor Primer，PCR反應時下游引物使用M13 Primer M4
操 作
   在同一反應管中進行 (反轉(zhuǎn)錄酶在進行PCR反應前須進行高溫失活)
 
■ 反轉(zhuǎn)錄反應時Primer的選擇
Random 9 mers
  適用于長的或具有Hairpin構造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在內(nèi)的所有RNA的反轉(zhuǎn)錄反應都可使用本引物。 用Random 9 mers合成的cDNA進行PCR反應時，必須使用特異性引物。
Oligo dT-Adaptor Primer
   適用于具有Poly(A)+ Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物 Primer 的rRNA及tRNA以及某些種類的真核生物的mRNA不具有Poly (A)+ Tail)。 本Primer設計巧妙，反轉(zhuǎn)錄效率高。反轉(zhuǎn)錄反應后，可用M13 Primer M4進行3′-RACE實驗。
特異性下游PCR Primer
(PCR時的下游引物)
  因其必須與模板序列互補，所以只適用于Target序列已知的情況。
 
■ 注意事項
1. 當同時需要進行數(shù)次反轉(zhuǎn)錄反應或PCR反應時，應先配制各種試劑的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等)，然后再分裝到每個反應管中。這樣，可使所取的試劑體積更準確，減少試劑損失，避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或?qū)嶒炛g產(chǎn)生的誤差。
2. 使用Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 酶等酶類時，應輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應管底部；由于酶保存液粘度高，分取時應慢慢吸取。
3. 酶制品應在實驗前才從-20℃中取出，使用后也應立即放回-20℃中保存。
4. 分裝試劑時務必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。
5. 最佳的PCR條件，因PCR擴增儀的不同而不同，所以在使用您的樣品之前最好先試做一下Control反應，以確定最佳的PCR條件。
 
 

頁面更新：2023-11-01 16:23:26

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