本制品是從96孔板或其他各種培養(yǎng)板培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞中制備細(xì)胞裂解液的試劑盒。制備的細(xì)胞裂解液可直接使用One Step或Two Step Real Time RT-PCR法對(duì)mRNA表達(dá)量進(jìn)行解析,或使用Western Blot方法對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)量進(jìn)行解析。使用本試劑盒快捷方便,操作簡(jiǎn)單,可在10分鐘內(nèi)完成從培養(yǎng)細(xì)胞中制備樣品,不需要進(jìn)行核酸精制和蛋白質(zhì)提取,可以直接作為Real Time RT-PCR反應(yīng)的模板或者作為Western Blot實(shí)驗(yàn)用的樣品。另外,試劑盒中添加的SDS-PAGE用Loading Buffer中不含2-ME,可以在不含2-ME條件下進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。
使用本試劑盒制備的細(xì)胞裂解液可與One Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time)等One Step Real Time RT-PCR試劑組合使用,2小時(shí)內(nèi)便可完成基因檢測(cè)分析。如果與反轉(zhuǎn)錄試劑PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time) 等組合使用,可在30分鐘內(nèi)完成cDNA合成。本試劑盒可與大多數(shù)Takara的Real Time RT-PCR制品組合使用。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
5X Loading Buffer:開封后室溫保存。 |
CellAmp Washing Buffer及CellAmp Processing Buffer融解后可以在4℃保存。 |
請(qǐng)注意避免污染。 |
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■ 注意事項(xiàng) |
1. 本品可與以下試劑盒組合使用 |
One Step Real Time RT-PCR:
One Step TB Green PrimeScript™ RT-PCR Kit II (Perfect Real Time)(Code No. RR086A/B)
One Step TB Green PrimeScript™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time)(Code No. RR066A/B)
One Step PrimeScript™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR064A/B)
One Step TB Green PrimeScript™ PLUS RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR096A/B)
Two Step Real Time RT-PCR:
PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR037A/B)
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time) (Code No. RR036A/B)
TB Green Premix DimerEraser™ (Perfect Real Time) (Code No. RR091A/B)
TB Green Premix Ex Taq™ II (Perfect Real Time) (Code No. RR820A/B)
TB Green Premix Ex Taq™ (Perfect Real Time) (Code No. RR420A/B)
Premix Ex Taq™ (Probe qPCR) (Code No. RR390A/B)
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2. CellAmp Washing Buffer、CellAmp Processing Buffer及5×Loading Buffer在融解過程中有析出物時(shí),請(qǐng)于室溫下完全融解后使用。
3. 在細(xì)胞裂解液制備過程中要迅速進(jìn)行,不要停滯。
4. 試劑在分裝時(shí)必須使用新的一次性槍頭,連續(xù)取樣時(shí)要更換槍頭,不得在不同試劑中使用同一個(gè)槍頭,盡量避免試劑污染。
5. RNA制備說明。
1) 盡量使用無菌、無RNase的一次性塑料器皿,如果不能確定是否除去RNase,則應(yīng)在使用前滅菌處理。如使用玻璃器皿,則需160℃干熱滅菌至少2小時(shí),或者用0.1%的DEPC處理水在37℃處理12小時(shí),然后高壓滅菌。
2) RNA實(shí)驗(yàn)用的器具和儀器建議專門使用,不要用于其它實(shí)驗(yàn)。
3) 盡量使用0.1%DEPC處理過的水配制試劑,并且使用前需要滅菌。如果所用試劑不能滅菌,可以使用無菌的容器以及無菌水進(jìn)行配制,在使用前過濾除菌。
4) 樣品制備的過程中還需要其他的防污染措施,包括使用無菌的一次性手套以及口罩等,防止汗水及唾液造成的污染。 |