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■ 制品內(nèi)容 (Code No.: 2240A) |
DNA Topoisomerase I (20 U/μl) |
100 U |
10X DNA Topoisomerase I Buffer |
1 ml |
0.1% BSA* |
1 ml |
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* BSA在-20℃下易產(chǎn)生沉淀,應(yīng)盡量避免多次反復(fù)凍融。短期使用請?jiān)?℃下保存。產(chǎn)生稍許沉淀不影響反應(yīng)效果。 |
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■ 制品說明 |
DNA Topoisomerase I 催化4種反應(yīng):
1. 使環(huán)狀超螺旋分子的超螺旋解開。
2. 在單鏈環(huán)狀DNA分子內(nèi)形成繩結(jié) (Knotting) 和解開繩結(jié) (Unknotting)。
3. 催化具有互補(bǔ)堿基序列的環(huán)狀單鏈DNA形成雙鏈閉環(huán)狀DNA分子。
4. 2個(gè)環(huán)狀雙鏈DNA分子之中的一個(gè)存在DNA鏈的切口時(shí),發(fā)生兩個(gè)分子的連結(jié)反應(yīng) (Catenation) 或者逆反應(yīng) (Decatenation)。 本酶由于來源于小牛胸腺,與來源于原核生物的酶性質(zhì)不同,即使在Mg2+不存在的條件下也顯示活性。而且,原核生物由來的DNA Topoisomerase I 只作用負(fù)鏈的超螺旋分子,而本酶則能使正負(fù)兩方的超螺旋分子均形成松散型。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 起源 |
Calf thymus |
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■ 活性定義 |
在37℃、30分鐘內(nèi)把0.5 μg/50 μl的超螺旋pBR322 DNA完全轉(zhuǎn)換成松散型的酶的活性定義為1 unit。 |
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■ 使用注意 |
pBR322 DNA和φX174 DNA的RF I (超螺旋分子) 用DNA Topoisomerase I 處理后電泳,膠中含溴乙錠 (EtBr) 時(shí),反應(yīng)前后DNA條帶的位置不發(fā)生變化。這是因?yàn)橛蒁NA Topoisomerase I作用而轉(zhuǎn)換為松散型的DNA受EtBr的影響,再次變?yōu)槌菪隣顟B(tài)。因此,使用Topoisomerase I反應(yīng)后,一般使用不含EtBr的瓊脂糖凝膠電泳,電泳終了后再用EtBr染色。 |
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