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| ■ 制品內(nèi)容 (25 μl反應(yīng)×50 次量) |
| 2X Premix for Bovine*1 |
650 μl |
| Primer Mix for Bovine*2 |
50 μl |
| Probe Mix for Bovine*3 |
50 μl |
| dH2O |
1 ml |
| Control DNA for Bovine (104 copies/μl) |
15 μl |
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*1 2X Premix For Bovine中含有反應(yīng)用dNTP Mixture、Buffer、酶等。
*2 Primer Mix for Bovine中含有擴(kuò)增用引物及內(nèi)參照 (Internal Control)。
*3 Probe Mix for Bovine中含有檢測用探針，須避光保存。 |
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| ■ 制品說明 |
本制品是利用Real Time PCR技術(shù)快速檢測牛*基因組DNA的試劑盒。采用雙標(biāo)記熒光PCR技術(shù)，根據(jù)線粒體DNA cytochrome c oxidase subunit I（COX I）基因上動物種間多態(tài)性的差異進(jìn)行牛源性成分鑒定。應(yīng)用多色熒光檢測技術(shù)，對反應(yīng)液中含有的兩種不同熒光染料進(jìn)行雙通道同步檢測，在同一反應(yīng)管內(nèi)對牛的COX I基因及內(nèi)參照（Internal Control）同時進(jìn)行擴(kuò)增，并通過標(biāo)記兩種不同熒光物質(zhì)（FAM、HEX）的特異性探針進(jìn)行特異性雜交，實現(xiàn)多色熒光同步檢測。其中對內(nèi)參照反應(yīng)的檢測，可以監(jiān)控反應(yīng)是否正常進(jìn)行，防止假陰性結(jié)果。制品中2X Premix for Bovine已經(jīng)將DNA聚合酶、反應(yīng)用Buffer、dNTP等試劑預(yù)混在一起。進(jìn)行實驗時，PCR反應(yīng)液的配制十分簡單。PCR反應(yīng)用DNA聚合酶使用了Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Taq™ HS，與Takara精心研制的Real Time PCR用Buffer組合使用，可以有效抑制非特異性的PCR擴(kuò)增，大大提高了PCR的擴(kuò)增效率。本檢測無需電泳，簡單快速。本制品適用于食品、化妝品和飼料等樣品中牛源性成分的鑒別。
本試劑盒（原Code No. D318）為《SN/T 2051-2008食品、化妝品和飼料中牛羊豬源性成分檢測方法實時PCR法》附錄B所述試劑盒。 |
| *：本制品經(jīng)驗證可對黃牛 (Bos taurus)、水牛 (Bubalus bubalis)、牦牛 (Bos grunniens) 進(jìn)行檢測，但由于檢測品種不同，擴(kuò)增序列可能存在變異，因此某些品種的?？赡軣o法被檢出。另外，對于鴨（Duck）、鵝（Goose）、馬（Horse）、豬（pork）、雞（chicken）、兔（rabbit）、綿羊（Sheep）、山羊（Goat）、人（Human）、白尾鹿（White Tail Deer）、印度梅花鹿（Axis Deer）、火雞（Turkey）和鴕鳥（Ostrich）等這些物種，添加genomic DNA 10 ng量時，無檢出或有檢出時但Ct值在35以上。（上述記載以外的物種沒進(jìn)行過確認(rèn)。） |
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| ■ 保存 |
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| -20℃。 |
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| ■ 注意事項 |
1. 本試劑盒檢測靈敏度高，為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。
① 第一區(qū)：反應(yīng)液配制區(qū)。
② 第二區(qū)：樣品制備區(qū)。
③ 第三區(qū)：樣品添加區(qū)及反應(yīng)檢測區(qū)。
三個區(qū)之間必須進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成污染。
2. 2X Premix for Bovine制品融解后，請上下顛倒輕輕均勻混合，避免起泡，并經(jīng)輕微離心后使用。
3. Probe Mix for Bovine應(yīng)避光保存。
4. 配制Real Time PCR反應(yīng)液時應(yīng)避免強(qiáng)光照射。
5. 反應(yīng)液的配制、分裝請一定使用新的 (無污染的) 槍頭、Microtube等，盡量避免污染。 |
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| ■ 各物種檢出結(jié)果例 |
| 物種 |
檢測結(jié)果（Genome DNA 10 ng量添加） |
| 黃牛（Bos taurus） |
有檢出 |
| 水牛（Bubalus bubalis） |
有檢出 |
| 牦牛（Bos grunniens） |
有檢出 |
| 鴨（Duck） |
有Ct值，但大于35圈 |
| 鵝（Goose） |
沒有檢出 |
| 馬（Horse） |
沒有檢出 |
| 豬（Pork） |
有Ct值，但大于35圈 |
| 雞（Chicken） |
沒有檢出 |
| 兔（Rabbit） |
沒有檢出 |
| 綿羊（Sheep） |
沒有檢出 |
| 山羊（Goat） |
沒有檢出 |
| 人（Human） |
沒有檢出 |
| 白尾鹿（White Tail Deer） |
有Ct值，但大于35圈 |
| 印度梅花鹿（Axis Deer） |
沒有檢出 |
| 火雞（Turkey） |
沒有檢出 |
| 鴕鳥（Ostrich） |
沒有檢出 |
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| Note：上述表格記載以外的物種沒進(jìn)行過確認(rèn)。 |
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