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體細胞治療中患者自體血漿的制備

為了減少患者自體細胞培養(yǎng)過程中未知微生物的交叉感染，國家藥監(jiān)局在《人體細胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》中已明確指明禁用同種異體血漿。從這個意義上來說在我國進行的CIK等細胞治療中是應(yīng)避免使用AB血漿的。患者自體血漿的合理應(yīng)用不僅可以降低細胞的培養(yǎng)成本，也可以取得更佳的培養(yǎng)效果。

操作例：
1. 注采50 ml 外周血，置于2支50 ml的離心管 (A、B管) 中，分別加入6％HES (羥乙基淀粉) 5 ml。
2. 混勻后室溫靜置30分鐘，紅細胞和HES結(jié)合沉降于離心管底部。
3. 將A、B管上部含有白細胞的血漿移至新的離心管 (C管) 。
4. 將A和B管離心 (400 g,10 min) 后,取紅細胞上部的少量血漿也加入C管。
5. 離心C管 (400 g,10 min),上清液移至新離心管 (D管)；C管下部的細胞作Ficoll分離PBMC用。
6. 將D管放入56 ℃水浴30分鐘，滅活補體。
7. 離心 (800 g,20 min) 除去D管中絮狀沉淀物，將上清移至新離心管 (E管) 。
8. E管中的上清 (約25 ml) 作為患者的自體血漿可在細胞培養(yǎng)中添加使用。
9. 使用G418進行抗性篩選。

注意：
6%HES (羥乙基淀粉) 是臨床藥品級別 (如北京費森尤斯卡比醫(yī)藥有限公司的產(chǎn)品：賀斯)，在最終的自體血漿中稍有混入，不存在安全問題，也不影響細胞的生長。
日本原產(chǎn)的GT-T551 H3培養(yǎng)基中只要加入上述的0.6％自體血漿，就可在淋巴細胞或DC細胞培養(yǎng)中獲得更好的培養(yǎng)效果。

頁面更新：2017-04-06 14:39:48

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