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■ 產(chǎn)品簡介 |
Capturem™ Streptavidin——利用鏈霉親和素快速富集和純化生物素化物質(zhì)。
鏈霉親和素是一種來源于鏈霉菌Streptomyces avidinii的細(xì)胞壁蛋白質(zhì),與生物素有非常強(qiáng)的親和力,這一互作特性在生命科學(xué)領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用于富集等相關(guān)研究。Capturem™ Streptavidin mini 純化柱和96-well 純化板是將鏈霉親和素固定在高容量的Capturem膜上,從而在室溫條件下就可以對生物素化的靶標(biāo)實現(xiàn)快速、高質(zhì)量的純化和富集,整個操作從上樣到洗脫僅需5~15分鐘。此外,還可以利用Capturem™ Streptavidin來捕獲或pull down靶標(biāo)分子或復(fù)合物。
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■ 產(chǎn)品特點(diǎn) |
· 簡單、快速的操作流程:室溫下操作即可,小量純化僅需5 min,96-well板僅需15 min
· 產(chǎn)物濃度高:少量的洗脫液即可實現(xiàn)高濃度洗脫
· 高質(zhì)量:樣品停留時間短,從而有效地防止了樣品聚集、失活,或者樣品中復(fù)合物解離
· 高重復(fù)性:每個純化柱的純化結(jié)果有高度的一致性
· 一次性使用:新型膜技術(shù)搭配一次性離心柱有效降低了污染和殘留的風(fēng)險
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■ 應(yīng)用 |
· 生物素化蛋白質(zhì)的純化或富集
· Pull down與生物素化的配體相結(jié)合的蛋白質(zhì)或oligo
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Capturem Streptavidin對不同樣品的載量和操作時間 |
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生物素標(biāo)記的抗體 |
生物素標(biāo)記的BSA |
生物素標(biāo)記的ssDNA |
游離的生物素 |
純化時間 |
Capturem Streptavidin mini純化柱和96-well 純化板 |
20-40 μg |
>15 μg |
1,000-1,500 ng |
>4,000 pmol |
15 分鐘 |
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實驗例 |
例1
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使用Capturem Streptavidin連續(xù)三次捕獲抗體。圖A–C.首先將含48 μg生物素化兔IgG的Binding Buffer上樣至平衡好的Capturem Streptavidin spin column中,這時32.0 ± 1.4 μg (圖B)的抗體被成功固定在膜上。然后洗滌一次,再將使用Binding Buffer稀釋的含20%小鼠血清且同時加入spiked-in靶抗體(約100 μg山羊抗兔抗體)的雜交瘤培養(yǎng)基加入到Capturem Streptavidin spin column中,分別使用Binding Buffer和PBS先后洗滌兩次,最后使用1.0 M甘氨酸洗脫3次,從生物素化的捕捉抗體上洗脫獲得高純度的靶抗體,收量約為42 ± 5 μg (圖C)。
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例2 |
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Capturem Streptavidin 96-well純化板具有高度重復(fù)性。分別對生物素化oligo(圖A)和生物素化BSA(圖B)進(jìn)行8次技術(shù)重復(fù)上樣,并使用離心的方法進(jìn)行靶標(biāo)捕獲。通過測定樣品上樣前后的OD值來對結(jié)合的分子進(jìn)行定量。捕獲操作按照標(biāo)準(zhǔn)的流程進(jìn)行,15 min之內(nèi)完成。 |
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