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■ 制品內(nèi)容 |
Linearized Template Vector (BspQ I)(50 ng/μl) |
10 μl |
FLuc Control Fragment (BspQ I)(100 ng/μl) |
10 μl |
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■ 制品說(shuō)明 |
Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis是用于使用TriLink公司的帽類似物[CleanCap Reagent AG或CleanCap Reactive AG(3’OMe)]構(gòu)建體外轉(zhuǎn)錄 (IVT)mRNA的模板質(zhì)粒。線性化的載體中包含T7啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄起始序列(AGG)、5’-UTR(untranslated region)和3’-UTR、Poly(A)序列(141堿基),因此只需要對(duì)目標(biāo)基因編碼序列(coding sequence: CDS)進(jìn)行In-Fusion無(wú)縫克隆,便可構(gòu)建體外轉(zhuǎn)錄的模板質(zhì)粒(圖1、2)。隨后用IIS型限制酶BspQ I消化,得到的線性化質(zhì)粒模板用于合成Poly(A)尾無(wú)冗余序列的mRNA,獲得的mRNA可用于人類、小鼠或其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞。使用線性化的模板質(zhì)粒,通過(guò)Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit(Code No. 6144)進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄(IVT),便可便捷地制備高產(chǎn)量的mRNA。
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■ 序列信息 |
序列信息以ZIP格式壓縮,但也可以使用 StuffIt Expander進(jìn)行解壓縮。
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■ 【Vector Map】 |
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【詳細(xì)信息請(qǐng)見(jiàn)鏈接】 |
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■ 注意事項(xiàng) |
1. 構(gòu)建模板質(zhì)粒需要In-Fusion克隆試劑,可購(gòu)買In-Fusion Snap Assembly Master Mix(Code No. 638947/48/49)。
2. 關(guān)于模板質(zhì)粒的設(shè)計(jì)和使用,請(qǐng)結(jié)合本產(chǎn)品的說(shuō)明書,以及Cloning Kit for mRNA Template (BspQ I)(Code No. 6143)的使用說(shuō)明書。請(qǐng)確認(rèn)您的目的基因CDS序列中不包含BspQ I位點(diǎn)。如果BspQ I位點(diǎn)存在于CDS中,為了不使氨基酸序列發(fā)生變化,請(qǐng)利用不同的密碼子(例如:丙氨酸密碼子的“GCU”到“GCC”等)變更DNA序列。
3. 如果制備的模板質(zhì)粒中混入了RNA酶,則反應(yīng)后獲得的RNA的產(chǎn)量會(huì)降低或RNA會(huì)片段化。反應(yīng)中使用的Tube和槍頭必須是專用的,進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請(qǐng)戴上一次性手套,注意不要混入RNA酶。
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