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不同大?。?.0-12.3 kb)的mRNA合成(有或無(wú)CleanCap)

 
實(shí)驗(yàn)方法:以不同大小的DNA為模板,使用PrimeCap T7 RNA Polymerase (low dsRNA)(Code No. 2560A)或T7 RNA Polymerase ver. 2.0(Code No. 2541A)在有或無(wú)4 mM CleanCap Reagent AG(TriLink)的情況下進(jìn)行IVT反應(yīng),并將合成的mRNA(200 ng)熱處理后進(jìn)行電泳檢測(cè)。
 
 
【左側(cè)泳道】:2541A
【右側(cè)泳道】:2560A
Marker:0.5-10 kb ssRNA Ladder Marker(Code No. 3417A)
 
結(jié)果顯示,無(wú)論有無(wú)CleanCap Reagent AG,兩種酶的電泳結(jié)果都沒(méi)有明顯差異,可以合成1.0-12.3 kb范圍內(nèi)的mRNA。
然后,檢測(cè)合成mRNA的產(chǎn)量以及IVT反應(yīng)時(shí)生成的dsRNA產(chǎn)量。
 
 
結(jié)果顯示,使用2560A時(shí),盡管mRNA產(chǎn)量與2541A相當(dāng),但可以大幅抑制dsRNA的生成。