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機(jī)構(gòu)用戶解決方案

產(chǎn)品選擇指南

技術(shù)服務(wù)信息

SPP系統(tǒng) SPP System™ Set
品牌 Code No. 產(chǎn)品名稱 包裝量 價格（元） 說明書 數(shù)量
Takara 3366 SPP System™ Set 1 Set ￥13,676
Takara 3367 SPP System™ I 1 Set ￥7,262
Takara 3368 SPP System™ II 1 Set ￥7,262
Takara 3369 SPP System™ III 1 Set ￥7,262
Takara 3370 SPP System™ IV 1 Set ￥7,262
 
■ 制品內(nèi)容
SPP System Set (Code No.: 3366)  
1. SPP System Set
   pCold I (SP-4) DNA、pCold II (SP-4) DNA
   pCold III (SP-4) DNA、pCold IV (SP-4) DNA		 各20 μg
2. pMazF DNA (20 ng/μl) 0.5 μg
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) 0.2 μg
   
SPP System I～IV (Code No.: 3367～3370)  
1. pCold I～IV (SP-4) DNA中一個(0.5 μg/μl) 20 μg
2. pMazF DNA (20 ng/μl) 0.5 μg
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) 0.2 μg
   
 
■ GenBank登錄
      Accession No.
     pCold I (SP-4) DNA AB248600
     pCold II (SP-4) DNA AB248601
     pCold III (SP-4) DNA AB248602
     pCold IV (SP-4) DNA AB248603
 
■ 鏈長    
     pCold I (SP-4) DNA 4,407 bp
     pCold II (SP-4) DNA 4,392 bp
     pCold III (SP-4) DNA 4,377 bp
     pCold IV (SP-4) DNA 4,359 bp
 
■ 制品說明
根據(jù)美國新澤西州醫(yī)學(xué)與牙科大學(xué)的井上正順博士小組的研究，大腸桿菌的蛋白質(zhì)MazF是一種能夠識別并切斷單鏈RNA特定序列 (ACA) 的核酸內(nèi)切酶 (mRNA Interferase)。利用MazF可以抑制宿主蛋白質(zhì)表達(dá)，只表達(dá)目的蛋白質(zhì)。利用這一技術(shù)，開發(fā)了Single Protein Production (SPP) System。
在SPP System中，在保持氨基酸序列不變的情況下用非ACA序列置換目的基因中的ACA序列，然后與MazF基因共表達(dá)。大部分宿主蛋白的mRNA因?yàn)橛蠥CA序列而被MazF分解，表達(dá)被抑制，但是目的基因的轉(zhuǎn)錄mRNA中不含有ACA序列，不能被MazF切斷，從而使目的蛋白得到高效表達(dá)。由于目的蛋白質(zhì)的不同，也有比單純使用冷休克表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)時表達(dá)量低的情況。構(gòu)建SPP系統(tǒng)，首先需要通過化學(xué)合成或點(diǎn)突變的方法制備無ACA序列的目的基因。設(shè)計(jì)無ACA基因的時候，在確保氨基酸序列不變的情況下將ACA序列替換，同時加入必須的酶切位點(diǎn)。其次，將無ACA基因克隆至含有無ACA轉(zhuǎn)錄區(qū)域的pCold (SP-4) 載體中。至此，用于目的片段的SPP系統(tǒng)表達(dá)的載體準(zhǔn)備完畢，將其與能夠表達(dá)足量的MazF的pMazF載體共轉(zhuǎn)化至E.coli中，形成了目的片段的SPP。
SPP System用的冷休克表達(dá)載體與pCold冷休克表達(dá)載體一樣，根據(jù)TEE序列、His tag和Factor Xa酶切位點(diǎn)序列有無，分成4個載體，分別是pCold I～IV (SP-4) DNA，pCold IV (SP-4)在多克隆位點(diǎn)的上游沒有附加的序列。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 特長
同位素標(biāo)記方便：標(biāo)記的目的蛋白質(zhì)最大可達(dá)到宿主胞內(nèi)新生蛋白質(zhì)的90%。
使用宿主廣泛：CspA啟動子來源于大腸桿菌，所以大部分的大腸桿菌都可作為宿主使用。因?yàn)楣脖磉_(dá)用載體pMazF DNA的篩選標(biāo)記是氯霉素，所以具有氯霉素抗性的大腸桿菌 (例如：Rosseta等)不能作為宿主使用。
 
■ 純度
用于pCold (SP-4) DNA系列載體。
1. 用雙脫氧測序法確認(rèn)多克隆位點(diǎn)。
2. 確認(rèn)多克隆位點(diǎn)上的限制酶Nde I, Sac I, Kpn I, Xho I, BamH I, EcoR I, Hind III, Sal I, Pst I 和Xba I只有一個酶切位點(diǎn)。
 
■ SPP System 原理圖
 
■ SPP System冷休克表達(dá)載體圖譜
  TEE序列 His tag序列 Factor Xa切斷序列
pCold I (SP-4) DNA ○ ○ ○
pCold Ⅱ (SP-4) DNA ○ ○ ×
pCold Ⅲ (SP-4) DNA ○ × ×
pCold Ⅳ (SP-4) DNA × × ×
 
 
■ MazF表達(dá)質(zhì)粒pMazF DNA載體圖譜
 

頁面更新：2024-02-29 09:25:23

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